Universal Magnetic Co-IP Kitの概要
Universal Magnetic Co-IP Kitは、より簡便かつ迅速に共免疫沈降 (Co-IP: Co-Immunoprecipitation) を行うことができるよう改良されたキットです。キット付属のプロテインG磁気ビーズを用いることで操作が簡素化され、バックグラウンドが大幅に低減されます。本キットには、哺乳動物細胞や組織から核抽出物および全細胞抽出物を調製するために最適化された試薬とプロトコルが含まれているため、核内タンパク質複合体および細胞質内タンパク質複合体のどちらにも使用できます。
核内のタンパク質複合体は壊れやすく核酸と分離することが難しいため、従来の共免疫沈降法では、抽出中にタンパク質間相互作用が壊れたりDNAに結合したまま失われたりするなど、 DNA結合タンパク質の抽出には適していません。Universal Magnetic Co-IP Kitは、全細胞抽出用の試薬だけでなく、核内タンパク質複合体の抽出に最適化された試薬も含まれています。
Universal Magnetic Co-IP Kitの特長
- 細胞や組織から、核内タンパク質複合体または細胞質内タンパク質複合体のCo-IPが可能
- マイルドな抽出方法により、タンパク質間相互作用を壊さず、複合体をDNAから分離することが可能
- 磁気ビーズによる低バックグラウンドで簡便かつ迅速な操作
- 阻害剤によりタンパク質修飾を維持
Universal Magnetic Co-IP Kitの構成品
Universal Magnetic Co-IP Kitは、ドライアイス同梱にて出荷されます。キット到着後は構成品を確認し、それぞれの試薬に適した温度で保管してください。すべての試薬は、受領後適切に保管された場合6ヶ月安定であることを保証いたします。本キットの構成品は以下の通りです。
- 10X PBS, 4°C
- 10X Hypotonic Buffer, 4°C
- Whole-cell Lysis Buffer, -20°C
- Co-IP/Wash Buffer, 4°C
- Detergent, 4°C
- 100X Phosphatase Inhibitors, -20°C
- Protease Inhibitor Cocktail, -20°C
- Deacetylase Inhibitor, -20°C
- 100 mM PMSF, -20°C
- 0.5 M EDTA, 4°C
- Digestion Buffer, 4°C
- Enzymatic Shearing Cocktail, -20°C
- Protein G Magnetic Beads, 4°C
- Bar Magnet, RT
- Mini Glue Dots, RT
Universal Magnetic Co-IP Kitのデータ
図1. 磁気ビーズの使用により、バックグラウンドを抑えつつ低ストリンジェンシーバッファーの使用が可能
図2. 独自のEnzymatic Shearing Cocktailにより、タンパク質複合体をDNAから分離し、ヒストン複合体の回収も可能
Universal Magnetic Co-IP KitのFAQ
Nuclear Complex Co-IP Kit (商品コード 54001)とUniveral Magnetic Co-IP Kit (商品コード 54002)の違いは?
主な違い:
Nuclear Complex Co-IP Kit (Cat No. 54001) | Universal Magnetic Co-IP kit (Cat No. 54002) |
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核抽出液 | 核抽出液もしくは細胞抽出液 |
ストリンジェンシーの違うwash bufferを使ってカスタマイズ可能 | 簡単 |
Protein G アガロースカラムを推奨 |
磁気ビーズを利用(キット同梱) |
Universal Magnetic Co-IP kit 使用時は、ストリンジェンシーを上げるべきですか?
Universal Magnetic Co-IP Kitに含まれるProtein G Magnetic Beadsは、非特異的結合が非常に少ないビーズです。これにより、低ストリンジェンシーなバッファーでもバックグラウンドは非常に低く、壊れやすいタンパク質複合体の回収を可能にします。特定の細胞株、刺激、抗体などにより、バックグラウンドが高くなる場合がありますが、その場合には、洗浄回数を4回から6回に増やすことをお奨めします。
このキットで調製したサンプルは、質量分析 (MS/LC-MS) で解析できますか?
アクティブ・モティフでは、質量分析での解析を検証していません。しかしながら、多くの文献で使用されています。質量分析装置の中には、バッファーに使用されている物質に対して影響があるかもしれません。お使いの機器のマニュアル、施設における使用不可物質の情報をご確認ください。該当物質が試薬に含まれているか情報提供が可能です。
Universal Magnetic Co-IP Kitの論文使用実績
お客様の投稿した論文実績データベースから、Universal Magnetic Co-IP Kitの使用例が検索可能です。
Universal Magnetic Co-IP Kitの技術資料
こちらもご参照ください
Name | Format | Cat No. | Price | |
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Universal Magnetic Co-IP Kit | 25 rxns | 54002 | ¥90,000 | Buy |
Universal Magnetic Co-IP Kit advantages
- Perform Co-IP of nuclear or cytoplasmic protein complexes, beginning from cells or tissue
- Magnetic beads speed and simplify the procedure while reducing background, enabling the use of low-stringency buffers that maintain complex integrity
- Nuclear extraction procedure removes nuclear protein complexes from the DNA without disrupting protein/protein interactions
- Inhibitor solutions included to preserve the integrity of protein modifications
Perform Co-IP of cytoplasmic & nuclear protein complexes
While Co-IP is often used to study cytoplasmic protein complexes, traditional methods are not optimal for studying DNA-binding proteins because these nuclear complexes are fragile and can be difficult to remove from the DNA. This causes them to either be disrupted during extraction, or to be lost because they remain bound to the DNA. For this reason, in addition to containing components for whole-cell extraction, the Universal Magnetic Co-IP Kit provides nuclear extraction reagents that have been optimized to preserve nuclear protein complexes. The reduced background provided by the low non-specific binding of the kit's magnetic beads makes it possible to use a low-stringency Co-IP/Wash Buffer that helps maintain the protein complexes (Figure 1). To further improve Co-IP of nuclear complexes, the kit’s proprietary Enzymatic Shearing Cocktail uses DNA digestion to release undissociated protein complexes from the DNA. Even histone complexes, which are not released from the DNA by traditional high-salt extraction methods, can be studied (Figure 2).
Figure 1: Co-Immunoprecipitation of a nuclear complex containing SRC-1 and ERα.
Figure 2: Detection of acetylated Histone H3.
Contents & Storage
Each Universal Magnetic Co-IP Kit provides sufficient reagents to make 25 nuclear and 25 whole-cell extractions, and then to perform 25 co-immunoprecipitations. Kits include PBS, Hypotonic Buffer, Whole-cell Lysis Buffer, Co-IP/Wash Buffer, Phosphatase Inhibitors, Protease Inhibitor Cocktail, Deacetylase Inhibitor, PMSF, EDTA, Digestion Buffer, Enzymatic Shearing Cocktail, Detergent, Protein G Magnetic Beads and a Bar Magnet for making a magnetic stand. The reagent storage conditions vary from room temperature to -20°C. Please download a manual for complete kit specifications and storage conditions. All reagents are guaranteed stable for 6 months when stored properly.
The following publications cite the use of and/or provide additional information about the Universal Magnetic Co-IP Kit:
- “PTEN regulates glioblastoma oncogenesis through chromatin-associated complexes of DAXX and histone H3.3.” by Benitez et al. (2017) Nature Communications 8(15223).